分子生物學(xué)是一個生物學(xué)領(lǐng)域,涉及基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生 RNA、RNA 翻譯成蛋白質(zhì)以及這些蛋白質(zhì)在細胞功能中所起的作用的過程。 自 1960 年左右以來,分子生物學(xué)家已經(jīng)開發(fā)出方法來識別、分離和操縱細胞中的分子成分,包括 DNA、RNA 和蛋白質(zhì)。
下面描述了分子生物學(xué)領(lǐng)域中使用的幾種技術(shù)。
1.聚合酶鏈式反應(yīng) (PCR) – 這是分子生物學(xué)中最重要的技術(shù)之一,主要用于復(fù)制 DNA。PCR 允許將單個 DNA 序列擴增成數(shù)百萬個 DNA 分子。 PCR 還可用于在 DNA 中引入突變或引入特殊的限制酶位點。 此外,PCR用于確定某個DNA片段是否存在于cDNA文庫中。不同類型的 PCR 包括用于擴增 RNA 的逆轉(zhuǎn)錄 PCR (RT-PCR) 和用于測量存在的 RNA 或 DNA 量的定量 PCR (QPCR)。
2.表達克隆——這種技術(shù)有助于科學(xué)家了解蛋白質(zhì)的功能。使用 PCR 將編碼特定蛋白質(zhì)的 DNA 克隆或復(fù)制到稱為質(zhì)粒的表達載體中。將質(zhì)粒引入動物細胞或細菌細胞。 該質(zhì)粒具有可刺激所需蛋白質(zhì)高表達的啟動子元件,因此可以檢查其酶活性。
3.凝膠電泳——這是分子生物學(xué)中使用的另一種重要技術(shù),通過在 DNA 穿過瓊脂糖凝膠時施加電場,根據(jù)它們的大小分離 DNA、RNA 和蛋白質(zhì)。
4.大分子印跡和探測——Southern印跡、Northern印跡、Western印跡和Eastern印跡等過程用于將DNA或RNA蛋白轉(zhuǎn)移到印跡膜上(通常在凝膠電泳之后),以便對其進行染色或放射性標記,然后進行可視化。
5.陣列 – DNA 微陣列或 DNA 芯片是安裝在固體表面(如顯微鏡載玻片)上的 DNA 斑點的集合,可用于同時量化大量基因的蛋白質(zhì)表達水平。該技術(shù)還可用于對各種不同的基因組區(qū)域進行基因分型。
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