PRM靶向定量蛋白檢測 * 實驗原理

PRM（平行反應監(jiān)視，parallel reaction monitoring）是目前靶向定量蛋白質組學的主流方法之一。利用四級桿質量分析器選擇性的檢測目標肽段的母離子信息，隨后在HCD碰撞池中發(fā)碎裂，最后進入高分辨率、高質量精度的Orbitrap分析器中，檢測所選擇的母離子窗口內(nèi)的所有碎片離子信息，這樣即可對復雜樣本中的目標蛋白/肽段進行特異性的定量分析。

PRM靶向定量蛋白檢測 * 檢測流程

PRM靶向定量蛋白檢測 * 技術應用

1、驗證高通量定量蛋白質組學（如iTRAQ、TMT、SILAC、Label free）的實驗結果
2、對目標蛋白質相對或絕對定量分析

PRM靶向定量蛋白檢測 * 輝駿服務優(yōu)勢

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PRM靶向定量蛋白檢測 * 服務信息

PRM靶向定量蛋白檢測 * 客戶文獻

1. Lisa H.et al: Development of a Parallel Reaction Monitoring Mass Spectrometry Assay for the Detection of SARS-CoV?2 Spike Glycoprotein and Nucleoprotein.Analytical Chemistry.2018，IF=4.402. 【研究內(nèi)容】：研究者采用數(shù)據(jù)獨立采集(DIA)定量質譜法對20例接受培美曲塞/鉑類化療的晚期肺腺癌患者的血清標本進行分析，并使用平行反應監(jiān)測(PRM)方法檢測了20例患者和22例晚期肺腺癌患者的16個候選血清標志物。研究證實了DIA、MS和PRM相結合的方法在識別晚期肺腺癌患者的血清預測生物標志物方面是有效的。 使用技術：蛋白組學prm實驗檢測、PRM靶向蛋白質組學服務、蛋白組 prm外包公司

2. Clara I.et al: Ethylene Receptors, CTRs and EIN2 Target Protein Identification and Quantification Through Parallel Reaction Monitoring During Tomato Fruit Ripening.Front. Plant Sci.2020，IF=6.785. 【研究內(nèi)容】：研究者為乙烯受體(ETR)及其下游組分CTR和EIN2的鑒定和定量，開發(fā)了一套包括樣品分離和平行反應監(jiān)測結合質譜分析（PRM-MS）的研究方案。以番茄為模式果實，研究了果實成熟過程中乙烯信號轉導相關蛋白豐度的變化。研究證實了鑒定和絕對定量番茄四個成熟階段的七個乙烯受體、四分之三的CTR和EIN2的可行性。 使用技術：蛋白PRM定量技術服務、平行反應監(jiān)測技術PRM、蛋白定量prm代做

蛋白組/代謝組實驗

? iTRAQ 定量蛋白質組學

? Label Free 實驗檢測服務

? LC-MS/MS 蛋白質譜鑒定

? DIA 全息掃描定量蛋白質
? 廣泛靶向代謝組學

蛋白/核酸相互作用實驗

? GST pull down

? RNA pull down

? DNA pull down

? Co-IP 免疫共沉淀

? TAP-MS串聯(lián)親和純化

分子細胞生物學實驗

? 基因調(diào)取/合成 (cDNA克隆)

?熒光定量PCR (qPCR)

? 載體構建實驗服務

?miRNA靶基因驗證
? 慢病毒包裝

科研產(chǎn)品

? 哺乳動物細胞表達載體

? 人cDNA克隆庫

? 慢病毒表達載體

? 慢病毒干擾載體

抗體工程服務

? 單克隆抗體測序

? 抗體從頭測序

? 抗體表達服務

? 重組抗體表達

實驗試劑盒

? RNA pull down 試劑盒

? GST pull down 試劑盒

? COIP 試劑盒

? Flag 試劑盒

輝駿實力

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中文標題：靶向蛋白質組學在子宮內(nèi)膜癌液體活檢診斷中的作用

發(fā)表期刊：Clinical Cancer Res

影響因子：12.531

運用技術：PRM靶向定量蛋白質組學（由輝駿生物提供技術支持）

● 內(nèi)容概述

子宮內(nèi)膜癌(EC)的診斷依賴于通過抽吸獲得的子宮內(nèi)膜活檢組織(即子宮抽吸物)中腫瘤細胞的觀察，漏檢率達22%，50%的EC組織分型和級別被錯診。基于這種現(xiàn)狀，本研究意圖通過液體活檢檢測蛋白標志物的方式得到一種更加準確的診斷方式。通過最新一代的靶向質譜采集技術LC-PRM對子宮吸出液體的52個蛋白含量進行測定，在EC組和對照組以及EC壓型組運用邏輯回歸模型對數(shù)據(jù)進行處理，處理結果顯示MMP9和KPYM兩種蛋白組合能夠有效診斷EC AUC值為0.96，CTNB1、XPO2和CAPG聯(lián)合檢測能夠有效區(qū)分各壓型，AUC值為0.99。該研究為臨床診斷提供了非常好的候選標志物。

● 方法流程

本研究遵循的一般工作流程如圖所示。116例患者的子宮抽吸液處理一式兩份，并在混合四極軌道質譜儀上進行PRM采集分析。

在每個樣本中，先前研究(15)中優(yōu)先考慮的52個候選生物標記物的相對豐度是通過對98個肽的分析來測量的。計算光譜相似性分數(shù)以確認多肽的同一性并檢測MS信號中的干擾。超過50%的樣本中沒有檢測到的五個肽被移除，導致總共有51個蛋白質被93個肽測量出來。通過重復樣品制備來評價分析流程的重復性，98%的檢測多肽的變異系數(shù)(CV%)低于15%，平均為3.6%。此外，來自同一蛋白質的多肽顯示出高度的相關性，因此，它們可以互換使用來評估蛋白質水平。只有三種蛋白(KPYM、OSTP和ROA2)的相關系數(shù)低于0.85，因為它們是由異構體特異性多肽監(jiān)測的。這些多肽被認為來自不同的蛋白質。

引用文獻

Elena Martinez-Garcia. et al: Targeted Proteomics Identifies Proteomic Signatures in Liquid Biopsies of the Endometrium to Diagnose Endometrial Cancer and Assist in the Prediction of the Optimal Surgical Treatment. Cancer Res.  2017，IF=12.531.