自1979年Towbin等人首次提出以來，蛋白質(zhì)免疫印跡（WB）被廣泛應(yīng)用于檢測(cè)混合物中特定蛋白質(zhì)的存在、評(píng)價(jià)目標(biāo)蛋白質(zhì)的大小和測(cè)量蛋白質(zhì)表達(dá)水平。WB的過程包括使蛋白質(zhì)混合物變性并基于分子量通過凝膠電泳分離它們，將分離的條帶轉(zhuǎn)移到印跡膜上，在封閉膜的剩余表面之后，用一抗識(shí)別感興趣的蛋白質(zhì)并通過二抗檢測(cè)。

Western Blot實(shí)驗(yàn)可以是在蛋白質(zhì)表達(dá)期間測(cè)試細(xì)胞裂解物的快速和骯臟的方式，以查看感興趣的蛋白質(zhì)是否表達(dá)以及表達(dá)水平是什么樣子。重要的是在純化前檢查來自用于桿狀病毒生產(chǎn)的P2擴(kuò)增的沉淀或大腸桿菌表達(dá)沉淀。此外，如果SDS-PAGE的污染物條帶是非特異性殘留或產(chǎn)物降解，則可以從WB容易地獲得雜質(zhì)信息，例如蛋白質(zhì)污染物的水平。此外，當(dāng)抗體是用于表達(dá)的目標(biāo)蛋白質(zhì)時(shí)，WB可以證明具有適當(dāng)分子量的重鏈和輕鏈的功能性表達(dá)，并且它們正確配對(duì)。 

蛋白質(zhì)印跡western blot技術(shù)被認(rèn)為是許多情況下必不可少的QC。例如，在體外測(cè)定中使用的蛋白質(zhì)，其中通過抗體標(biāo)記或蛋白質(zhì)本身進(jìn)行檢測(cè)，WB驗(yàn)證是關(guān)鍵的。對(duì)于提交給監(jiān)管機(jī)構(gòu)和同行評(píng)審期刊評(píng)審員的ELISA數(shù)據(jù)，WB也被廣泛接受為確認(rèn)所用蛋白質(zhì)正確的最小確認(rèn)QC步驟。

WB技術(shù)實(shí)驗(yàn)的局限性在于其重現(xiàn)性差且易于用于定量目的的錯(cuò)誤。一抗特異性檢測(cè)目的蛋白是關(guān)鍵。應(yīng)用WB有時(shí)受到缺乏針對(duì)蛋白質(zhì)而不是標(biāo)簽的完全驗(yàn)證的抗體的限制。根據(jù)所用的表達(dá)系統(tǒng)（E.大腸桿菌、芽孢桿菌、HEK293、CHO等），但在一些情況下，可能存在其它蛋白質(zhì)與表達(dá)中使用的標(biāo)簽的非特異性結(jié)合，因此需要對(duì)表達(dá)系統(tǒng)“背景噪聲”進(jìn)行徹底表征。具有高分子量的蛋白質(zhì)在凝膠上的分辨較差，使得更難以進(jìn)行WB。因此，需要另外的蛋白質(zhì)QC和表征方法以獲得關(guān)于蛋白質(zhì)純化和鑒定的更多信息。

Western blot技術(shù)服務(wù)-輝駿生物優(yōu)勢(shì)

WB技術(shù)實(shí)驗(yàn)外包信息

Western-blot 實(shí)驗(yàn)結(jié)果示例